一例高致病性蓝耳病的诊断

一例高致病性蓝耳病的诊断 高致病性蓝耳病的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株，不同日龄的猪均可感染发病，尤以妊娠母猪和仔猪最易感染。广东某猪场(500母猪)从未免疫过蓝耳病疫苗，自2016年5月起，部分妊娠后期的母猪出现发烧、早产等症状，早产仔猪在出生后不久死亡，部分处于哺乳期的仔猪出现不同程度的呼吸道症状，死亡率10%左右。解剖病死仔猪，可见肺部肿胀，质地较硬，肉眼可以观察到间质增宽。笔者初步怀疑主要是蓝耳病毒感染引起的病情。为进一步确诊，无菌采集体温升高和呼吸道症状明显发病猪的肺脏、脾脏、扁桃体、小脑和淋巴结组织进行实验室检测。

病原学诊断

参照鉴别蓝耳病高致病性与经典毒株复合RT-PCR方法，以及从NCBI下载蓝耳病毒株的基因序列，分别针对蓝耳病病毒多个基因设计特异性引物。将采集的病死猪的肺脏、脾脏、小脑和淋巴结等组织在低温条件下剪碎，研磨处理后，加入灭菌生理盐水，制成10%的悬液，反复冻融3次，置于4℃贮存备用，再进行RT-PCR检测。检测结果显示：高致病性蓝耳病病毒阳性(见图1，1-2号为检测样品孔，3号为阳性对照孔，4号为阴性对照孔)，而猪瘟病毒和伪狂犬病毒检测结果为阴性(见图2，图3)。

　

结合现场询问信息、病理解剖和实验室PCR检测结果，最终确诊为高致病性蓝耳病毒感染发病。该猪场蓝耳病毒gp5基因测序与JXA1株同源性最高，为97.5%。(见图4)

讨论

应用荧光定量PCR或普通RT-PCR检测临床样品中的病毒核酸是一种快速的病原诊断方法。由于PCR技术不需经过细胞培养可直接提取核酸，有着较高的特异性和敏感性。同时，这种方法根据设计的引物不同，除了可以直接检测美洲毒株和欧洲毒株外，可以分别鉴别经典毒株或高致病性变异毒株。这种方法的敏感性和特异性远远超过IFA。但是此种方法需要特殊的实验室设备，并且要求较为严格的操作环境，目前还仅限于实验室中使用。

由于PRRSV易发生基因突变和基因重组，不同毒株在猪体内持续感染过程中可能发生病毒重组出现新的病毒亚群，使得控制蓝耳病变得更加复杂。定期地对猪场病料进行PCR检测并对阳性产物测序并作基因同源性分析可以了解猪场的蓝耳病毒的流行毒株的情况。通过长期跟踪测序可以发现病毒在猪场内部的来源和演变，各个猪场之间是否存在交叉感染，病毒是通过后备猪的引种带进猪场还是猪场内部的演变，大致推测出新病毒是应用新疫苗引入或者是通过外源污染引入。蓝耳病测序的变异大小与致病程度并没有必然的联系，虽然有时基因序列发生1%的差异，也有可能会带来蓝耳病的暴发。