一种新的诊断程序用来确诊猪的呼吸道疾病综合征

一种新的诊断程序用来确诊猪的呼吸道疾病综合征

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引言

呼吸系统疾病是全世界猪的最重要的疾病。猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是由多种病原感染引起的肺炎的统称。PRDC被发现能导致30%-70%的发病率和4%-20%死亡率。支原体(M.hyo)、圆环病毒2型(PCV-2)、猪流感病毒(SIV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经常被诊断为猪群PRDC的主要原发性病原体。

在丹麦，实验室通过“猪呼吸系统疾病PCR程序包”定期诊断PRDC，其中包括每个群体取1-3个肺脏通过实时PCR/逆转录酶(RT-)PCR，对猪肺炎支原体(M.hyo)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的特异性进行检测。本研究目的是为了比较肺脏和肺拭子的PCR定性和定量检测结果。

材料与方法

该研究比较了用部分肺组织样品和从同一肺叶上获得的拭子的实时PCR和RT-PCR检测结果。研究中做PRDC诊断用的肺组织来自丹麦猪群。DNA和RNA纯化前，肺组织匀浆标准样品通过TissuelyzerII(QIAGEN)匀浆珠打浆获得。做平行实验的其它样品通过使用标准棉签擦拭同一肺叶取得。这些拭子收集在2 mL含有0.1%蛋白胨的0.9%盐水中。两种样品的RNA和DNA分别使用RNeasy Mini试剂盒和QIAamp DNA Mini试剂盒进行纯化，并通过实时PCR/RT-PCR技术检测M.hyo、PCV2、SIV和PRRSV。之前的研究已经验证收集拭子时蛋白胨的使用，也没有任何迹象显示对PCR有抑制作用。在畜禽水平上对每个样品进行定性和定量分析(CT-值的比较)。

结果

总共采集并检测了99份带有呼吸道症状的猪肺脏和对应的肺拭子。这些样品来源于44个猪群。病猪的实时PCR和RT-PCR定性检测结果列于表1中。当比较两种采样方法时，卡帕分析显示结果在0.71-1.00之间。定量结果通过配对t检验(数据未展示)分别以图形方式显示并进行分析。

结论与讨论

当用卡帕分析比较时，发现成对样品检测的定性结果是一致的，但是两者相关性不完美。定量结果显示，与肺拭子样品相比，肺组织样品普遍低于阈值周期(CTS)，这表明肺组织比拭子更敏感。正在进行的替代拭子材料和调整拭子采样技术实验，可能会增加这个程序的敏感性，与使用肺组织做实验需要匀浆相比，改进以后的程序将会更便宜并且需要更少的资源。