非洲猪瘟三大主要蛋白质的Luminex多重抗体检测技术

非洲猪瘟三大主要蛋白质的Luminex多重抗体检测技术 库百科养殖网讯:

引言

血清学诊断是伊比利亚半岛和撒丁岛控制非洲猪瘟项目的主要检测方法，已被广泛应用于检测并发现携带非洲猪瘟病毒（ASFV）的动物。已确定ASFV的几个结构蛋白和非结构蛋白为血清检测的备选抗原，其中， p30、p54和p72是最佳的、最具有研究价值的结构蛋白，是商品化非洲猪瘟血清抗体ELISA试剂盒的最常见检测对象。

虽然ELISA是应用最广泛的检测方法，但它仅限于检测单个生物标志物。日益发展的鉴别荧光微球技术（Luminex®Corp，Austin，TX），能利用抗原耦联微球在同一个反应中检测不同抗原产生的抗体。本
研究的目的是通过使用多重荧光微珠免疫测定法（FMIA）来评估非洲猪瘟的3种主要蛋白p30、p72和p54在一次检测中的血清抗体反应。

材料和方法

非洲猪瘟病毒经稀释后接种9头实验猪，这些猪能够长期排毒，于接种后0天、6天、12天、15天、19天、26天、33天、40天、47天、54天和61天，采集血清样品。含p30、p72和p54基因的质粒在大肠杆
菌中高度表达，用镍亲和层析法纯化被标记的聚融合p30、p72、p54基因的重组多肽，对纯化了的重组p30、p72和p54多肽进行共价偶联。本文还研究了基质效应缺乏对检测结果可能带来的影响，例如抗原、
未特定免疫与多重技术的交叉干扰之间相互作用的研究。此外，对不同的分析参数，例如耦合条件、试剂的浓度、潜伏期时间和缓冲液组分都进行了优化。

结果

ASFV多肽（P30，P72，和P54）从接种后第0到61天点之间的的血清抗体反应结果，如图1所示，为血清的S/P平均值。从第6天开始能检测到P72（1/9，11%）抗体，并在第12天能同时检测到
P30（9/9，100%）和P54（8/9，89%）。第12、15和19天，所有猪（9/9，100%）的P30、P54、P72多肽检测结果为阳性。

图1 用多重荧光微珠免疫测定法（FMIA）检测非洲猪瘟病毒P30、P54和P72蛋白随时间变化的抗体值（S/P比值）

结论与讨论

这是第一个关于Luminex技术特异性检测ASFV循环抗体的研究报告。这种新方法可以作为探讨各种临床情况下不同抗原反应性的初步筛选工具。作为一个开放的诊断平台，该检测技术在未来还可以应用到
其它抗原和检测样品（如唾液）。初步实验结果表明，P30的诊断性能最好，可以考虑把P30作为合适抗原用于其他检测试验的研究，如酶联免疫吸附实验（ELISA）。