猪伪狂犬病的分子生物学技术

猪伪狂犬病的分子生物学技术 猪伪狂犬病的分子生物学技术[/page]1．核酸抹针检测技术 用斑点杂交法应用32P标记PRV全基因组DNA和重组质粒作探针检测细胞培养物中的PRV-DNA，均能检测lOpg的PRV-DNA，且有较高特异性。魏伟等．用光敏生物素标记PRV特异性糖蛋白GP50克隆重组颗粒PUP作为探针，检测实验感染乳猪15头份，证明通过PCR和分子克隆技术制备的PRV特异性糖蛋白基因片段的光敏生物探针，能有效地用于检测伪狂犬病。

2．PCR技术 应用PCR技术对PRV进行基因扩增，均获得了特异敏感的结果。

诊断实践中应当了解各种诊断方法的价值。病理组织学检查采取可疑病例脑脊髓组织切片，做苏木素一伊红染色，在伴有非化脓性淋巴细胞性脑炎和脑脊髓神经节炎的情况下，神经细胞、胶质细胞和毛细血管内皮细胞内可检出A型核内包涵体。

免疫荧光试验取自然病例的病料（或组织细胞培养物），如脑的压片或冰冻切片，用直接免疫荧光检查，可于神经节细胞的胞浆及核内产生荧光，几小时后可取得可靠的结果。

病毒分离可以用病料直接接种猪肾细胞或鸡胚细胞，病毒繁殖后，可出现典型的细胞病变。另外也可用被检的猪肾来制备细胞，用新出芽生长的细胞做指示细胞，或者将被检猪肾细胞组织剪碎，与指示细胞混在一起培养，可观察到病变。通过以上方法得到的假定阳性培养液，要通过病毒中和试验来鉴定。

猪伪狂犬病的分子生物学技术[/page]1．核酸抹针检测技术 用斑点杂交法应用32P标记PRV全基因组DNA和重组质粒作探针检测细胞培养物中的PRV-DNA，均能检测lOpg的PRV-DNA，且有较高特异性。魏伟等．用光敏生物素标记PRV特异性糖蛋白GP50克隆重组颗粒PUP作为探针，检测实验感染乳猪15头份，证明通过PCR和分子克隆技术制备的PRV特异性糖蛋白基因片段的光敏生物探针，能有效地用于检测伪狂犬病。

2．PCR技术 应用PCR技术对PRV进行基因扩增，均获得了特异敏感的结果。

诊断实践中应当了解各种诊断方法的价值。病理组织学检查采取可疑病例脑脊髓组织切片，做苏木素一伊红染色，在伴有非化脓性淋巴细胞性脑炎和脑脊髓神经节炎的情况下，神经细胞、胶质细胞和毛细血管内皮细胞内可检出A型核内包涵体。

免疫荧光试验取自然病例的病料（或组织细胞培养物），如脑的压片或冰冻切片，用直接免疫荧光检查，可于神经节细胞的胞浆及核内产生荧光，几小时后可取得可靠的结果。

病毒分离可以用病料直接接种猪肾细胞或鸡胚细胞，病毒繁殖后，可出现典型的细胞病变。另外也可用被检的猪肾来制备细胞，用新出芽生长的细胞做指示细胞，或者将被检猪肾细胞组织剪碎，与指示细胞混在一起培养，可观察到病变。通过以上方法得到的假定阳性培养液，要通过病毒中和试验来鉴定。

中和试验此方法已被大多数国家采用，是一种相对敏感的血清学方法：采用常规方法进行。实验时应注意传染性牛鼻气管炎病毒与伪狂犬病病毒具有相同的抗原成分，可以出现单项的交叉反应。

酶联免疫吸附试验(EIISA)以抗原包被微量板，然后加入被检血清，再加入标记的抗猪IgG抗体，最后加人酶底物。此方法对检测伪狂犬病的抗体比中和试验更敏感。

多聚酶链反应(PCR)技术是80年代建立起来的一项体外酶促扩增DNTA新技术，可用于PRVDNA的扩增，也适用于检测PRV潜在感染猪。

另外，用于伪狂犬病诊断的方法还有琼脂扩散及微量免疫扩散试验、补体结合试验、皮肤试验、间接血凝试验、对流免疫电泳等方法。

在类症鉴别中要注意与李氏杆菌病、猪乙型脑炎、猪脑脊髓炎、狂犬病、猪水肿病等进行区别。