研究品种和年龄对公猪精液的影响的操作方法

研究品种和年龄对公猪精液的影响的操作方法 品种和年龄对公猪精液的影响初步研究分为五部分：①实验的意义；②所需材料；③研究方法；④；⑤讨论与结论，本文主要讲述第三部分：研究品种和年龄对公猪精液的影响的具体操作方法。

第一步：计算平均值 用移液器取2μl精液与50μl37°C生理盐水混合后滴于预热的载玻片上，加盖20x20mm的盖玻片，在200倍光学显微镜视野下，分别对2个视野中精子的运动状态录像，3位实验人员观看录像，并采用0~10的10级评分标准打分，直线前进运动的精子为100%者评为10级；90%者为9级，以此类推，计算平均值。

第二步：精子活率（VIA） 采用伊红-苯胺黑活体染色技术染色，在400倍光学显微镜视野下，计数300个精子，计算出其中所含的活精子数所占比例。死活精子判定标准：死精子着红色，活精子不着色，呈灰白色。

第三步：精子畸形率（ABN） 采用龙胆紫活体染色技术染色，在光学显微镜400倍视野下，计数300个精子，进行形态结构异常精子统计。

第四步：精子密度（DEN） 采用精子密度仪进行测定，通过精子密度仪的透光系数计算精子的密度，计算公式：精子密度（106/ml）=透光系数×1121。

第五步：总精子数（TOT） 总精子数（109）=精子密度×射精量

第六步：数据统计分析 分别以使用时间6个月、22个月为界限（公猪的平均开采月龄按照8月龄开始计算）将所有的样本分成三个年龄组：青年组（月龄小于14）、壮年组（月龄为14至 0）和老年组（月龄大于30）。用SAS9.1软件的GLM程序对537个样本数据分别对品种年龄进行双因素方差分析。