实时RT-PCR方法对比以确保PEDV和TGEV的准确检测

实时RT-PCR方法对比以确保PEDV和TGEV的准确检测 库百科养殖网讯:

前言

猪流行性腹泻病毒（PEDV）是导致猪群严重腹泻和脱水的主要病因。猪流行性腹泻病毒属于冠状病毒科，是一种有包膜，单股正链RNA病毒，基因组大小约28KB。1971年英国首次报道发现猪流行性腹泻病毒，而日本，中国，韩国和泰国同样报道过猪流行性腹泻病毒感染。美国在2013年5月（1-5）第一次检测到猪流行性腹泻病毒。兽医诊断实验室快速研发敏感及特异性的实时RT-PCR（RRT-PCR）方法，以检测在各种猪和环境样品中的PEDV。在这项研究中，我们将明尼苏达州（UMN）大学研究的猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎多重RRT-PCR检测方法与商品化猪传染性胃肠炎病毒-猪流行性腹泻病毒多重RRT-PCR检测方法进行了对比。

材料和方法

猪小肠标本，粪便样品，粪拭子，唾液样品，环境样品被定期提交给美国明尼苏达大学（UMN）兽医诊断实验室进行肠道病原体检测。样品匀浆后利用MagMAX96病毒RNA提取试剂盒（赛默飞科技）提取
RNA，根据试剂盒说明书进行操作。商品化猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻病毒多重RRT-PCR方法已经初步成形，根据试剂盒说明书进行操作，而UMRRT-PCR检测方法是利用Path-ID多元一步法RT-PCR试剂
盒（赛默飞科技），根据试剂盒说明书进行操作。

结果

猪唾液样品（N=39），肠匀浆标本（N=107），粪便样品（N=136），粪拭子（N=47），呕吐样品（N=12）和环境样品（n=55），共计396份样品，用来对比UMNTGEV-PEDV多重RRT-PCR法和商品
化TGEV-PEDV多重RT-PCR法。该UMNTGEV-PEDV多重RRT-PCR比商品化TGEV-PEDV多重RT-PCR有较低的Ct值。该UMNTGEV-PEDV多重RRT-PCR法比商品化TGEV-PEDV多重RT-PCR多检测到53份阳
性PEDV样品（其中唾液样品6份，肠匀浆样品9份，粪便样品6份，粪拭子样品13份和环境样品19份）。这些商品化TGEV-PEDV多重RT-PCR检测为阴性而UMNTGEV-PEDV多重RRT-PCR法另外检测到的
PEDV阳性标本，由二重UMNPEDVRRT-PCR，针对N基因扩增，确认为阳性。该UMNTGEV-PEDV多重RRT-PCR法比商品化TGEV-PEDV多重RT-PCR多检测到11份TGEV阳性样品（其中肠样品4份，粪便样
品7份）。

结论与讨论

UMNTGEV-PEDVRRT-PCR法比商品化TGEV-PEDV多重RT-PCR法具有更多优势。精确的检测PEDV和TGEV临床样本对于最大限度地减少这两种病毒的传播是很重要的。临床诊断实验室就是提供高灵敏
度和特异性测定法，以帮助防止和控制病原体，所以许多检测方法必须经过评估，然后筛选出养猪行业的最佳检测方法。