蓝耳病毒在猪肺泡巨噬细胞中的复制导致CD8+ 细胞毒性T细胞和CD4+辅助性T细胞的抗原表位递呈结构

蓝耳病毒在猪肺泡巨噬细胞中的复制导致CD8+ 细胞毒性T细胞和CD4+辅助性T细胞的抗原表位递呈结构分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ在感染晚期出现较小的下调

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蓝耳病毒(尼多病毒目, 动脉炎病毒科, 动脉炎病毒属)利用CD163和CD169作为受体感染猪的单核细胞和巨噬细胞。病毒的复制引起宿主免疫调节，导致弱的适应性免疫和先天免疫反应，同时病毒持续存在于组织巨噬细胞中。为了阐述弱的蓝耳病毒特异性T细胞反应和病毒持续存在于组织巨噬细胞的机制，我们努力检测是否蓝耳病毒在巨噬细胞中的复制分别引起CD8+细胞毒性T细胞和CD4+辅助性T细胞的抗原表位递呈结构分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的下调。

材料和方法

蓝耳病毒SD23983毒株用于研究病毒的复制和猪肺泡巨噬细胞表面分子的下调。猪肺泡巨噬细胞来源于14日龄蓝耳阴性健康仔猪的肺脏组织。为了解释由蓝耳病毒引起猪肺泡巨噬细胞表面分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ和SWC的下调作用，用两种类型的磁性纳米颗粒使蓝耳病毒同步感染猪肺泡巨噬细胞(ViroMag TM和ViroMag TM R/L，OZ biosciences公司，法国)并将蓝耳病毒SD23983浓缩。流式细胞仪表面染色和分析用于检测猪肺泡巨噬细胞表面分子(CD3，CD4，CD8，SWC3，CD14，MHC-Ⅰ，MHC-Ⅱ)表达的水平。为了检测猪肺泡巨噬细胞在磁转染0、6、12、18和24小时后的感染力，对细胞内蓝耳病毒N蛋白进行细胞内染色染色操作。

结果

用分离到的新鲜猪肺泡巨噬细胞，我们确定了磁转染效率和蓝耳病毒复制的动力学。猪肺泡巨噬细胞在磁转染0、6、12和18小时后细胞内蓝耳病毒N蛋白被染成阳性的比例分别为11.1%、30.4%、47.0%和27.1%。另外，我们分析了MHC-1和MHC-Ⅱ在磁转染后不同时间点的表达动力学。在磁转染后18小时MHC-1和MHC-II分子下调到最低水平。在磁转染后24小时，下调图像仍然清晰，但比猪肺泡巨噬细胞上的其它分子相对较弱(11.5-44.2%)，如SWC3在磁转染后24小时下调67%。

结论与分析

在猪肺泡巨噬细胞中，MHC-1和MHC-Ⅱ分子在磁转染24小时后有适当的下调，但在磁转染前18小时观察不到该现象。该结果暗示蓝耳病毒在猪肺泡巨噬细胞中的复制可能不是抑制T细胞(细胞毒性T细胞和辅助性T细胞)介导的免疫反应。本研究结果将对疫苗的设计有所帮助，设计的疫苗能够诱导具有保护力的CMI反应，以对抗早期和晚期递呈的蓝耳蛋白。